青絲線草多糖分析論文參考

【摘要】目的建立青絲線草中多糖的含量測定方法。方法採用苯酚—硫酸比色法。結果測得含量為13.74%，精密度及重複性良好，回收率為99.35%,RSD為1.3%。結論此方法操作簡便，準確性好，為青絲線草的質量控制提供了一個定量方法和參考依據。

【關鍵詞】青絲線草；多糖

1儀器與材料

1.1儀器WFH-207B三用紫外分析儀（上海精科實業有限公司）；SB-5200超聲波提取器（上海新芝生物技術研究所）；AB204-N電子分析天平（梅特勒-託利多儀器有限公司）；TDA-8002型恆溫水浴箱（餘姚工業儀器二廠）。

1.2試劑無水葡萄糖（批號：0403251，廣州新成化工廠，AR級），其餘化學試劑均為國產AR級。

1.3樣品青絲線草產自廣東江門地區，經廣州中醫藥大學中藥鑑定教研室周誠教授鑑定為爵床科槍刀藥屬植物槍刀藥Hypoestespurpurea(L.)Soland的全草。

2方法與結果

2.1青絲線草多糖的提取與精製稱取青絲線草粗粉50g，置圓底燒瓶中，加石油醚（60～90℃）400ml，浸泡2h，迴流提取1h，濾過，濾渣揮幹溶媒，以80%乙醇400ml迴流提取2次，1h/次，濾過，濾渣置圓底燒瓶中，加蒸餾水600ml浸泡1h後迴流提取1h，濾過，再加蒸餾水400ml迴流提取1h，濾過，濾液合併，濃縮至200ml，Sevage法除蛋白後加95%乙醇使含醇80%，靜置過夜，抽濾，濾渣以無水乙醇、丙酮依次洗滌多次，得精製多糖，60℃烘乾備用。

2.2苯酚試液的配製取苯酚100g，加鋁片0.1g和碳酸氫鈉0.05g，蒸餾，收集182℃餾分。稱取5g，加水溶解，定容於100ml棕色容量瓶（臨用前新配）。

2.3測定波長的`選擇精密吸取0.02mol/ml葡萄糖溶液2.0ml，置15ml具塞試管中，加苯酚試劑1.0ml混勻，加濃硫酸5.0ml，混勻，放置15min，置40℃水浴中加熱10min，取出放置15min，以蒸餾水同法操作為空白，在460～510nm測定吸收度，確定最大吸收波長為488nm。

2.4標準曲線的製備精密稱取經105℃乾燥至恆重的無水葡萄糖505.6mg，置50ml量瓶中加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，得標準液貯備液。取此貯備液分別稀釋為0.005056，0.010112，0.020224，0.040448，0.050560mg/ml的5個不同濃度的對照品溶液。精密吸取溶液各2.0ml置10ml具塞試管中，加苯酚試劑1.0ml混勻，再迅速加入濃硫酸5.0ml混勻，放置15min後置40℃水浴中加熱10min，取出放置15min，以相應試劑為空白，照分光光度法在488nm處測定吸收度。求得標準曲線迴歸方程：A=12.975C+0.012,r=0.9998（n=5）。樣品在0.005～0.05mg/ml的範圍內線性良好。

2.5換算因素的測定取60℃乾燥至恆重的精製青絲線草多糖約10mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻。精密吸取該溶液2.0ml，照標準曲線製備項下方法，自“加苯酚試劑1.0ml”起，依法測定吸收度，按下式計算換算因素：f=Cs/C(Cs為多糖液濃度，C為多糖液中葡萄糖濃度)。計算得f=3.93。

2.6穩定性實驗取樣品溶液、標準品溶液及精製多糖溶液各2.0ml，照標準曲線製備項下方法，自“加苯酚試劑1.0ml”起，依法測定吸收度，並分別於0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，60min測定，結果表明樣品液至少在1h內穩定性良好。

2.7精密度實驗取樣品約0.2g，精密稱定，按樣品測定項下操作，測吸收度，結果RSD=0.82%（n=6）。

2.8重複性實驗取藥材粉末6份，精密稱定，按樣品測定項下操作，測吸收度，計算得RSD=0.75%（n=6）。結果表明該方法具有較好的重複性。

2.9回收率實驗取藥材粉末6份，每份約0.1g，精密稱定，精密加入精製多糖約13mg，按樣品測定項下操作，測吸收度。結果見表1。表1回收率實驗結果（略）

回收率（%）=(測得量-樣品中多糖含量)/多糖加入量×100%

2.10樣品測定取樣品粉末約0.2g，精密稱定，加80%乙醇100ml，超聲振盪提取20min，過濾，藥渣用熱80%乙醇洗滌，揮幹乙醇後加蒸餾水100ml超聲振盪提取20min，過濾，濾渣再加80ml蒸餾水超聲振盪提取20min，過濾，殘渣用熱水洗滌，洗液併入提取液，待冷後轉移於250ml容量瓶，加蒸餾水稀釋至刻度，精密吸取2.0ml，置10ml具塞試管中，按“標準曲線”項下方法自“加苯酚試劑1.0ml”起，依法操作，測得吸收度，計算樣品中多糖含量。結果見表2。表2青絲線草多糖含量測定結果（略）

3討論

本文利用苯酚—硫酸法測定了青絲線草的主要活性成分—多糖，作為評價該草藥質量的指標之一。此項實驗研究為首次報道，本文對青絲線草的主要化學成分的研究結果為開拓新藥源提供了新的科學用藥依據。

多糖含量的測定有多種方法，本文選用苯酚—硫酸法，生成橙黃色溶液，在488nm處有特徵吸收。此方法方便簡單，最為常用，但需嚴格控制水解條件，否則誤差較大。

本實驗方法操作簡單，所用儀器簡單，消耗成本低，在缺乏先進檢測儀器的基層單位，實為一種可靠、簡單的檢測方法。

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