中草藥對弧菌的抑制作用研究論文
摘 要：目的 闡明現常用抑菌中草藥在水產養殖業的用藥療效，為水產養殖細菌性疾病的防治提供用藥參考。方法 採用微量肉湯稀釋法測定了12種水產養殖常用的抗菌中藥產品對5株常見海洋致病菌的最低抑菌濃度(MIC)。結果 NZ方與市售“蝦倍健”抑菌效果最佳，對副溶血弧菌、嗜水氣單胞菌、創傷弧菌、哈維弧菌、溶藻弧菌的最低抑菌濃度在0.313～1.250 g/L，而其他市售抗菌中草藥大黃末、六味黃龍散、三黃散、根蓮解毒散、七味板藍根散、大蒜素、病毒速滅亡、穿梅三黃散、白頭翁口服液、健肝寶和地錦草末對5種海洋致病菌抑制濃度均大於40.000 g/L。 結論 給水產養殖細菌性疾病的防治提供了用藥建議及使用參考。
關鍵詞：NZ方; 弧菌; 中草藥
近年來，隨著對蝦疾病的爆發越來越頻繁，我國對蝦養殖業特別是華南地區的對蝦養殖受病害肆虐情況嚴重，部分地區對蝦幼體患病死亡率達100%，給殖業造成了嚴重的經濟損失，如何有效防治對蝦病害侵襲也倍受水產業界人士關注和重視[1-2]。蝦的紅體、偷死、肌肉白濁、爛眼爛鰓、熒光、黑斑等症狀多由弧菌及嗜水氣單胞菌引起，而根據上述病症，農業部“用藥指導”也給出相關的用藥建議。其中，大黃末、地錦草等被廣泛推薦應用。根據現行國家標準，抗菌類中藥製劑有38種，筆者選取其中最為常用的12種中藥製劑與NZ方對5株常見的海洋致病菌進行體外抑菌作用的比較，為水產養殖細菌性疾病的防治提供用藥參考。
1 材料與方法
1.1 菌株
標準菌株：副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticuss，V.p);溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus，V.a);哈維氏弧菌(Vibro harveyi，V.h);創傷弧菌(Vibrio vulnificus，V.v);嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，A.h)由中國南海研究所提供。
1.2 培養基
2216E 液體培養基(青島高科園海博生物技術有限公司)。2216E瓊脂培養基(青島高科園海博生物技術有限公司)。
1.3 藥物及其製備
NZ方(檵木葉、半邊蓮花、地膽草等8味)：由中藥開發研究所研製。大黃末：每1 kg飼料用本品5.0 g;六味黃龍散：每1 kg飼料用本品4.0 g。三黃散：每1 kg飼料用本品5.0 g;根蓮解毒散：每1 kg飼料加本品10.0 g。七味板藍根散;每1 kg飼料用本品2.5 g;大蒜素：每1 kg飼料用本品0.6 g。蝦倍健：每1 kg飼料用本品4.0 g;病毒速滅亡：每1 kg飼料，用本品20 mL。穿梅三黃散：每1 kg飼料用本品4.0 g;白頭翁口服液：每1 kg飼料用本品3 mL。健肝寶：每1 kg飼料用本品2.0 g;地錦草末：每1 kg飼料用本品10.0 g。分別取上述藥物16.0 g製備成100 mL藥液。
1.4 儀器
儀器：分析天平(BT211B，德國Sartorius公司);手提式壓力蒸汽滅菌鍋(OIJ2006-04，上海東亞壓力容器製造有限公司);雙人單面淨化工作臺(SW-CJ-2FD，蘇州淨化裝置有限公司);恆溫培養箱(上海一恆科學儀器有限公司)。
1.5 藥物配製
將受試藥物用適宜溶劑配製成0.8 g/ mL的藥液，高壓滅菌後，按二倍遞減濃度稀釋，共配製成11個梯度濃度的藥物稀釋液。
1.6 菌種復甦與培養
將冷藏儲存的菌種在瓊脂板上劃線培養復甦24 h，再挑取生長良好的單菌落接種到裝有2216E肉湯培養基的搖菌管中，置恆溫培養箱中37 ℃培養至對數期。
1.7 測量
以2216E肉湯作為空白對照液調零，在波長600 nm處測定菌懸液OD值，計算含菌數，並稀釋成1×106 CFU/ mL的菌懸液。
1.8 加樣孵育
按無菌操作吸取藥液和菌懸液各100 μl於96孔板第1-11孔中，第12孔加入配製溶劑和菌懸液各100 μl作陰性對照，置恆溫培養箱中37 ℃培養20 h。
1.9 結果判讀
肉眼觀察，藥物最低濃度孔無細菌生長者，即為該試菌MIC值。難判斷者，可將該孔中培養液於無菌瓊脂板上劃線，37 ℃培養20 h後讀取結果。
2 結果與分析
NZ方與12種市售抑菌中藥品對5種危害較大的海洋致病菌的最低抑菌濃度的測定結果可知，蝦倍健抑菌濃度最低，抑菌效果最佳，對副溶血弧菌、嗜水氣單胞菌、創傷弧菌的最低抑菌濃度為0.313 g/L;對哈維弧菌、溶藻弧菌的`最低抑菌濃度為1.250 g/L;穿梅三黃散次之，在5.000～40.000 g/L;而大蒜素、病毒速滅亡、根蓮解毒散的抑菌效果最差，均在40.000 g/L以上，見表1。
對12種藥品與NZ方的最低抑菌濃度及其標示用量進行比較，其中僅有蝦倍健標示用量大於最低抑菌濃度，也就是說，按產品標示用法用量，僅有蝦倍健能達到預期抑菌效果，見表2。
3 討論
根據上述研究結果顯示，市面上抗菌藥物種類繁雜，而養殖戶面對細菌感染疾病的爆發卻無可奈何，盲目用藥，直接損害了養殖戶的利益[6-7]。在筆者隨機選取的10餘種常用抗菌中藥的實驗結果看來，情況令人堪憂，這些在養殖過程中的應用十分廣泛的藥品，在對其進行的最低抑菌濃度試驗中其最低抑菌濃度根本無法達到抑菌防治效果[8]。
隨著抗生素在水產養殖的廣泛使用。近年來，耐藥菌的不斷產生，養殖戶對細菌性疾病的爆發束手無策，給養殖業帶來重大的損失，中草藥以其安全、副作用小、無耐藥性等獨特的優勢，逐漸成為研究和開發的熱點，市面上標榜抗菌的中草藥五花八門，但加工粗糙，質量良莠不齊，誇大藥效，導致養殖戶用藥無效，對中草藥產品失去信心[9-11]。
